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Western Blotting(蛋白质印迹法)是分子生物学中常用的一种实验方法。其基本原理是将蛋白质样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转移到固相载体（例如纤维素薄膜）上，利用抗原抗体反应来检测目的蛋白质。Western Blotting一般操作流程如下：

封闭

■ 封闭试剂的选择：在这步实验操作中，为了防止蛋白质检测抗体非特异性与膜结合，对未结合蛋白质的膜区域进行封闭很重要。有时使用特定的一种封闭剂未必能达到预期效果，因此可以多准备几种封闭剂进行点杂交预实验，以确定合适的封闭剂。常见的封闭试剂有脱脂奶粉、BSA，但这类封闭剂都含有哺乳动物来源成分，可能会与哺乳动物来源抗体产生非特异性交叉反应。Takara提供了两种不含哺乳动物来源成分的封闭剂，为您提供更多的封闭剂选择：

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Western BLoT Blocking Buffer (Fish Gelatin) （Code No. T7131A），本产品使用鱼来源明胶作为封闭剂，同哺乳动物来源的奶粉和BSA相比，不会与哺乳动物来源抗体产生非特异性交叉反应，能够明确地检测出特异性抗原。由于是即用型试剂，无需稀释，因此既可直接用于封闭Western印迹膜；也可作为一抗、HRP或AP标记二抗的稀释液。

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Western BLoT Blocking Buffer（Protein Free）（Code No. T7132A）是一款化学成分组成的封闭缓冲液，不含蛋白质，可以很好地抑制非特异性信号，能够有效地用于检测磷酸化蛋白质。这款同样也是即用型试剂。

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一抗反应→洗涤→二抗反应→洗涤

■ 抗体剥离试剂(Stripping Buffer)：Stripping Buffer是指能从膜上去除一抗和二抗，但不影响膜上结合的待测蛋白质的试剂。由于目的蛋白质的浓度和使用的抗体浓度不同，胶片曝光条件也不同，因此使用这款比较有特点的抗体剥离试剂可以有效去除膜上的抗体，帮助大家反复摸索实验条件，节省抗体。

Western BLoT Stripping Buffer （Code No. T7135A），使用本试剂能在室温下从膜上将一抗、二抗和检测试剂去除，之后可在同一膜上进行目的蛋白质和其他蛋白质的再次检测，可以帮助您重新研讨和优化实验条件。

■ 抗原抗体反应促进剂：可以显著提高检测灵敏度，即使仅有少量抗体也可以有效进行抗体反应，提升检测信号强度。

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Western BLoT Immuno Booster （Code No. T7111A）适用于包括Western Blotting和ELISA在内的各种免疫检测，可提高最终的检测灵敏度(从数倍到数十倍)。

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Western BLoT Immuno Booster PF （Code No. T7115A）不含蛋白质，可与Western BLoT Blocking Buffer(Protein Free)(Code No. T7132A)联用，在不含外源蛋白质的体系下进行检测和分析。

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其它关联产品：蛋白质定量试剂

■ 蛋白质定量试剂的选择：为了保持不同样品的上样量一致，以便于后续结果分析，通常会在WB之前对蛋白质样品进行定量处理。常用的蛋白质定量方法有BCA法和Bradford法(考马斯亮蓝法)，Takara准备了对应的蛋白质定量试剂。

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TaKaRa BCA Protein Assay Kit （Code No. T9300A）针对不同种类蛋白质，测定值变动小。可在20-2,000 μg/ml浓度范围内，蛋白质浓度与吸光度值成线性关系，受到表面活性剂的影响也较小。

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TaKaRa Bradford Protein Assay Kit （Code No. T9310A）操作简单迅速，可在1-1,000 μg/ml浓度范围内进行蛋白质定量，并且不受还原剂的影响。

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