崩溃！流式配色改了 N 次，师兄用这份「指南」 5 分钟解决
师兄
师妹，上周让你做的多色流式细胞术怎么样了？
小师妹
选择困难了，抗体、荧光素都太多，挑的得我眼花缭乱！
小师妹
更难的是，导师不满意，又让我再加两个很弱的靶标，很纠结要怎么配色……
师兄
多色流式细胞术配色确实非常有挑战性, 师兄刚好有一份从 0 到 1 玩转多色配色的五步法指南，借给你看看，应该能解决你的问题！
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多色流式细胞术真的好用又好看，不仅能够使用多个标记物进行单细胞研究，分析多个细胞群之间的关联性。还能减少样本用量，提高样本检测通量，提高实验效率。不过对于多色流式来说，设计多色 Panel，是第一大难题！
这份Bio-Rad 梳理的「 5 步掌握多色流式指南」 助力更多色的流式细胞术实验。同时 Bio-Rad 也发起流式细胞术实验好物推荐，包括提升实验效率的流式抗体与试剂，让你的多色流式实验开挂。
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以下是您看完必须收藏+转发+点赞的「多色流式细胞术必须掌握 5 步法」
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01
了解细胞群体的生物学
充分了解你感兴趣的细胞群的生物学，包括细胞频率、抗原表达和抗原定位。这不仅可以帮助实验设计，同时可以确保你正确阐述结果。
• 确认检测细胞群体的频率，确保你在样本采集的时候记录足够的细胞数。
• 确认检测细胞指标的表达水平，确认你的检查方法能够识别稀有或低表达标记。
• 明确细胞各个指标的定位，从而确保你的试验方案可以检测细胞表面、胞内或核内指标。
02
如何选择抗体和荧光染料？
确认选择的抗体可以被运用到流式细胞仪，确保抗体偶联的荧光染料与所拥有的流式细胞仪的激光、滤光片和检测器相兼容。
• 如果你正在构建一个多色方案，为了尽量减少光谱重叠，选择跨激光和滤光片染料。
• 为了最佳检测效果，亮染料应预留给稀有指标，亮度低的染料分配给表达丰富的指标。
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03
考虑实验的对照
合适的实验对照可以确保实验结果的真实性，可以减少可能的繁重的故障排除，确保实验数据的有效性。在流式实验中需要考虑的对照有阴性和阳性对照、荧光减一对照、活性对照和同型对照。
• 活性对照可以用于确认细胞健康。死细胞和垂死细胞有较强的自发荧光，同时会非特异性结合荧光抗体，因此你需要从分析中排除这类细胞，确保流式结果的有效性。
• 在多色实验所选的荧光染料的谱图重叠不可避免，荧光减一对照可以帮助你确认合适的圈门策略。
• 同型对照可以帮助确认染色中是否存在非特异性结合。
04
规划你的样本制备
用来检测的细胞类型和来源会决定你的样本制备。
• 检测胞内抗原需要选择合适的破膜剂。
• 为你的实验选择合适的缓冲液，个别高亮染料需要配套染色缓冲液。
• 在上机检测前过滤你的样本，从而避免结块和细胞聚合。
• 请记住并非所有抗体会识别先前固定的表位。
05
合适的实验条件，让你事半功倍
在进行任何实验开始之前，确认是否选择了合适的激光和滤光片用于荧光染料的检测。
• 确保仪器的电压已经进行了合适的调整，在轴上可以看到阴性群体和阳性群体。在不同的样本之间保持相同的电压进行分析。
• 实验之前确保仪器可以顺利进行并且确保质控顺利通过。
• 花时间设置合适的圈门策略，允许你将目标群体和其他群体区分，此外在不同样本之间保持圈门策略的一致。
以上就是 Bio-Rad 倾情推荐流式细胞术工作流程及好物推荐, 解锁多色流式实验，让你多色流式实验进度开挂事半功倍。
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1. 相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断。
2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。
内容策划：那雪妍
项目审核：周育红
题图来源：BIO-RAD
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