如何用Image J 对Western blot 条带进行灰度分析

有兴趣张老湿Office科研作图微信群的，请加微信号Havana90，拉你进去。

Image J软件：Windows 版本

第一步：软件安装

1. 下载地址：http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html

2. 下载windows 32位带Java版本，双击软件安装。

第二步：界面介绍

 软件界面

第三步：图片分析

1.下图为样板图片

2. 导入图片：File> Open> Sample1.jpg

图片导入后，Sample1.jpg在新的窗口中打开

3. 图片类型设置：Image> Type> 8 bit

4. 去除图片背景：Process> Subtract Background> …

4.1 Subtract Background 窗口：Rolling ball radius 设为50 pixels，勾选light background，可选preview，点击“OK”确定

5. 工具栏:选择“矩形选框”

6. 最大化“Sample1.jpg”窗口，便于矩形选择，矩形选择第一个泳道

7. 标记“矩形选框”为1：矩形选择后，调整矩形至合适大小，按下数字键“1”，或者Analyze> Gels> Select Fist Lane。

8. 选择“泳道2”：拖动“1”的矩形框，会出现两个矩形选框，拖动矩形框至泳道2，调整位置，并按下数字键“2”，Image J 会自动调整大小使“矩形框2”与“矩形框1”保持同一水平。

9. 继续拖动，会出项新的“矩形选框”，调增至泳道3，并按下数字键“2”（注意：是按下数字键“2”），重复9至6个泳道全部选择。

10. 所有泳道选择后，按下数字键“3”，出现分析图谱。

注：最好先不要对电泳图加黑色线框，做完灰度分析之后再进行，就不会有下面所谓中间两条线了。

11.“直线”封闭峰：工具栏选择“直线”，从起峰处至落峰处。

12. 计算峰值：工具栏> Wand(tracing) tool,点下刚才封闭的区域，峰值结果出现在新的窗口中。

计算结果：

12.其他泳道，以此类推

剩下的就是将各条带的数据绘图啦，如果你有重复电泳就能画出带误差线的柱状图来了。