案例分享：当PCR实验室发生污染时该怎么做？

    现在的部分检测实验室靠高投入采购高品质的试剂和仪器来提高检测的灵敏度，这种投入产出立竿见影。但是，随着检测量的加大，实验室污染导致的假阳性的问题愈发严重，如幽灵般如影随行。这其实也体现了检测的特点，不能简单用仪器和试剂的品牌价格来评估检测质量，检测的核心是人和严格的试验流程和管理制度。

    今天跟大家分享一个我的实验室发生核酸污染的案例，从我发现污染到处理的全过程。

一、常在江湖飘，哪能不挨刀

    想绝对避免核酸检测实验室的污染是不可能的，我们能做的是随时保持警惕，尽早发现，及时处置，最大程度减少损失。

    2020年12月4日，周五，实验员发现在一次qPCR实验中虽然阴性对照成立，但是4份阴性样品出现了扩增曲线。可以确定实验中发生了污染，但是从何时开始污染的？污染源是什么？影响到的试验有多少？我们需要一一排查。

二、亡羊补牢

    1.停止所有实验活动，查看当天所有的试验结果，发现只有一个实验受到了污染。

    2.清理试剂准备区、核样本制备区和扩增区所有开封的试剂耗材；

    3.离心管架、试管架等可重复使用的物品浸泡到84消毒液中过夜，第二天用清水清洗后晾干使用；

    4.对移液器内外表面、核酸提取仪内部先用酒精擦拭后，再用核酸去除剂擦拭，同时启用备用的移液器；

    5.对各区的生物安全柜、洁净工作台和实验台面先用酒精擦拭后，再用核酸去除剂擦拭；

    6.对实验室地面用84消毒液进行清洁；

    7.开窗通风。

    实验室一旦发生污染，第一时间不是纠结于到底哪里污染了，到底谁的责任导致的污染。绝大多数时间我们无法确定污染源，更不能轻易排除一项污染源。而是第一时间果断采取清除污染的措施。这些措施是否有效还需要后续验证。

三、污染清除的实验验证

    1.在试剂准备区的洁净工作台面、样本制备区的生物安全柜内部、核酸提取仪内部和扩增区台面分别放置开盖装有PBS的离心管，过夜；

试剂准备区的洁净工作台

样本制备区的生物安全柜

样本制备区的核酸提取仪

扩增区台面

   2.用采样拭子蘸PBS后对实验台面、生物安全柜台面和洁净工作台面反复擦拭后，放入PBS中进行洗脱。

生物安全柜的台面取样

取样后的洗脱

3.用采样拭子蘸PBS后对移液器的内外表面进行取样，取样后放入PBS中进行洗脱。

移液器内表面取样

4.将配液的移液器和加模板的移液器换上无滤芯枪头，在PBS中反复吹吸10次，测试移液器内部是否存在污染。

测试配液的移液器

5.测试结果

5.1测试结果发现样本制备区的生物安全柜内加模板的移液器内外表面擦拭拭子为核酸阳性，其他检测都是阴性。

实验室污染测试结果

12.7移液器内外表面的荧光结果

5.2对样本制备区的生物安全柜内加模板的移液器进行清洁和擦拭后，第二天对该移液器内表面和外表面擦拭拭子进行检测，仍有扩增分别为39.89和39.63。

12.8移液器内表面

12.8移液器外表面

5.3对样本制备区的生物安全柜内加模板的移液器进行清洁和擦拭后，过二天后对该移液器内表面和外表面擦拭拭子进行检测，检测结果为阴性。

12.10移液器内表面

12.10移液器外表面

移液器污染测试结果

四、持续监测

    本次污染事件中从周五发现，周一进行清理测试后，周二即完全恢复了实验活动。虽然可以确定的是样本制备区的生物安全柜内加模板的移液器发生了污染。但是由于可能造成污染的因素很多，移液器是否是唯一的污染因素我们很难确定。后续的几天仍然在检测中增加阴性对照，持续对环境等样品进行监测，确保污染被彻底清除。

污染的预防和处理见：如何预防和处理PCR检测实验室的核酸污染？

试剂耗材等辅料的质检见：老师都没教过的PCR实验室辅料质检

    很多检测实验室被持续的不定期核酸污染所困扰，很重要的原因是未能

及时发现污染并在第一时间彻底的处理。每个实验室都应该结合自己实验室的情况建立规范的污染处置规程，确保在下一次污染发生时能尽早尽快解决。

请关注本公众号：原博士带你做检测