1月14日武汉疾控预防医学服务中心在其公众号上发出消息，1月15日开始可开展新冠病毒抗体水平检测，25元/次。

祝“可大人可小孩”1月9日新婚快乐，百年好合！“可大人可小孩”这位同学长着一副国泰民安、家族兴旺、至少2孩的脸，永远积极向上、笑脸盈盈、时刻对干饭保持着热情，这样的姑娘真是娶到就是赚到！

“以数据追求真理，用事实捍卫良知！”是2022年原博士带你做检测的公众号的简介，原来的是“检测界的老司机”。在2022年这一年里，阴谋论、假消息满天飞，各种大V、专家纷纷发表自己的观点，事实却变得扑朔迷离。事实与真理从来就不是可以轻易获得的，需要基于真实的数据，基于我们已有的知识去探索去验证，或许我们无法一下获得事实的全部，但是这是人类面对未知世界的唯一手段。2022年原博士带你做检测的很多文章都是围绕着如何通过科学的计算获得相对科学的结论的文章，就是基于上述的考量。一.2022年用户数据

目前荧光定量PCR的核酸检测仍然是新冠病毒检测的金标准，由于其敏感性和特异性均可达到99%以上，因此无论是初筛还是确诊都适用。抗原检测由于检测原理与核酸检测不同，荧光定量PCR的LOD在10^2-

2022.10.28日，国家卫生健康委等13部门联合发布了《遏制微生物耐药国家行动计划（2022-2025年）》，几乎是以举国之力与微生物耐药展开决战，原博士带你讲解为什么微生物耐药如此的紧迫。关于印发遏制微生物耐药国家行动计划（2022-2025年）的通知

图显示2020年禽流感的流行毒株以H5N8为主，2021-2022年以H5N1为主；(B)图显示感染动物以家养鸭和鸡为主；(C)

我们对于未知的事物，通常要经历恐惧、好奇、怀疑、接受、习以为常到深信不疑的过程。现在大家对混样检测应该十分熟悉了，我们经历了单检、5合1、10合1和20合1，混样检测在大规模新冠检测中发挥了巨大作用，但是对于混样检测，从最佳混样数量的计算到混样检测的试剂验证，相关的数据一直不多。我对混样检测的态度是：混样可以，需要充分的科学依据！本文会在之前20合1来了！混样检测的极限在哪里？

前段时间有个朋友问我检测所需采样量，我一开始觉得这个问题很简单，找了一篇文章里面的一些些表格发给了这位朋友。随后的一段时间里，这个问题时常出现在我脑海中，采样量的计算真的这么简单吗？我尝试以我粗浅的流行病学和统计学知识为大家介绍一些入门基础，如有错误请大家指正！

要实现定量，通常需将测量的结果与国际单位制SI单位联系起来。国际单位制的七个基本单位：长度（米）、质量（千克）、时间（秒）、电流（安培）、热力学温度（开尔文）、物质的量（摩尔）和发光强度（坎德拉）。

根据世界卫生组织WHO的最新数据，从2021.513-6.10全球共有28个国家报告人感染猴痘病例，其中确诊病例1285例，亚洲至今无病例。2.猴痘病毒全球动物间感染情况

猴痘不管从传播途径还是感染能力上都不可能形成大范围的流行，普通人群没必须过度关注和焦虑。但是从事与实验动物和野生动物相关的人员应密切保持关注和警惕。请大家积极打赏、积极分享、积极点赞！

最近有两个事件引人瞩目，一个是上海的“假阳性”事件：另一个是“北京多例感染者出现症状后核酸仍为阴性”事件：“5月4日，在北京市新型冠状病毒肺炎疫情防控工作新闻发布会上，市疾病预防控制中心副主任、全国新型冠状病毒肺炎专家组成员庞星火介绍，疫情分析发现多例感染者出现呼吸道症状后核酸检测仍为阴性的情况。”“在5月9日下午举行的北京市新冠肺炎疫情防控工作新闻发布会上，北京新冠肺炎疫情防控工作领导小组检疫检测工作组副组长，北京市卫生健康委员会副主任、新闻发言人李昂通报称，在近期的飞行监督检查中发现，个别核酸检测机构存在送检不及时、报告不准确、实验室管理不严格等问题，严重影响核酸检测质量和疫情防控工作效果。”我今天不去探讨阴谋论和由于检测实验室技术和管理不规范导致的假阴性和假阳性，而是从大规模群体筛查的角度去分析假阳性和假阴性可能产生的因素。本文和前几篇文章存在很强的逻辑关系，相关概念不清楚的可以看看以往的文章。一、检测方法

copies/ml，诊断敏感性为90%，R0=1.5，每3天和7天进行检测，有50%和75%的人服从隔离。则需要至少6周时间才能把流行率降低至＜1%。5.公式

“4月18日，上海市人民政府新闻办公室举行疫情防控工作新闻发布会，市卫健委一级巡视员吴乾渝介绍，根据市疫情防控工作安排，从15日开始对封控区、管控区内所有人员进行“抗原+核酸”组合检测筛查，对防范区内所有人员进行抗原检测筛查：封控区内，今天起到21日，每天进行1次核酸检测。管控区内所有人员，18日、19日、21日各进行1次抗原检测；20日进行1次核酸检测，错峰下楼采样。防范区内所有人员，7天进行2次抗原检测，这几天我们已做过一次，21日再做1次。”一、“抗原+核酸”组合检测筛查的原理未来抗原+核酸”组合检测筛查将成为一种常见的筛查手段，使用多种不同检测方法进行组合检测时主要有两种策略：1.平行试验Parallel

以下是2则新闻：“3月15日，国务院联防联控机制召开新闻发布会。国家卫生健康委临床检验中心副主任李金明在发布会上表示，抗原检测应该用在高风险、高流行率的聚集性感染的人群检测，一般人群不要随意做抗原检测。””3月27日上午，上海疫情防控工作新闻发布会上的消息：目前，全市已抗原检测1400多万人，今天还将继续开展。从中发现了一些抗原检测阳性人员，立即对其进行了核酸检测，检测结果出来前，就立即管控。”上一篇公众号的文章中跟大家一起分享了一些概念Se、Sp、NPV、PPV以及AP等，文章中有几处错误，但是也不打算修改了，想让大家在读文章时保持着怀疑的态度。今天跟大家一起回顾一下全球各国对新冠抗原检测试剂的性能评价情况。新冠抗原检测不适合普通人群的数学解读一、世界卫生组织WHOWHO于2021年10月6日发布了《抗原检测用于诊断SARS-CoV-2感染》临时指南（Antigen-detection

3月15日，国务院联防联控机制召开新闻发布会。国家卫生健康委临床检验中心副主任李金明在发布会上表示，抗原检测应该用在高风险、高流行率的聚集性感染的人群检测，一般人群不要随意做抗原检测。

动物用新冠疫苗的研发各国已经竞相启动，其对阻断新冠在人和动物间的传播至关重要，我国在人用新冠疫苗的研发上已经全球领先，在动物用新冠疫苗的研发上也应该再接再厉。请大家积极打赏、积极分享、积极点赞！

ELISA，它的出现将蛋白质检测技术直接带入到单分子、数字化检测时代。SIMOA检测的生物学原理仍然是经典的免疫反应-双抗夹心法，所不同的是，SIMOA技术将约250,000个捕获抗体包被在2.7

马上就要过年了，先向春节期间仍然奋战在检测一线的小伙伴们致敬。大部分实验室应该都暂停了一年来忙碌的实验活动，对于实验室来说，充分利用好这个难得的休假时间能让我们明年的实验有个好的开端。下面原博士就来给大家介绍下实验室正确的放假方式：

2020年8月17日国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组发布了《新冠病毒核酸10合1混采检测技术规范》新冠病毒核酸10合1混采检测技术规范

摘要宏基因组测序（mNGS）在新发突发传染病以及常规检验阴性的感染性疾病诊断中发挥了重要作用。近期，国内相继发表了多个共识阐述了临床应用及实验室规范，但生物信息分析程序及方法也是mNGS重要环节，而目前学界尚未有一致的认识。为提高临床对mNGS结果的理解，首都医科大学附属北京同仁医院检验科鲁辛辛教授、解放军总医院第一医学中心临床检验科王成彬教授作为通讯作者，根据国内外的发展现状，结合国内测序实验室常规做法，发表了专家共识，从数据库构建、下机数据比对、结果注释、平台及人员素质等方面提出了规范化要求。一常用的生物信息学名词1、序列及读长序列：文库在高通量测序设备上进行测序，得到的碱基序列称为序列。读长：序列的读长是影响分析准确度的重要因素，最大读长取决于所选的测序平台。序列数：通常在检测报告中显示的序列数为该物种属或种特异序列条数。2、原始数据原始数据：一次测序产生的没有经过任何过滤的全部测序结果称为原始数据。高通量测序下机的原始数据经信号转换后得到含常规碱基（A、T、C、G等）及对应碱基测序质量信息的数据，通常包括接头序列、标签序列、测序数据，以fastq格式存储。3、可用数据可用数据：可用数据是原始数据经过处理得到的直接用来分析的数据。原始序列数据经质量过滤，去除接头序列、标签序列后，得到的可用于比对的序列称为可用数据，包含人源及微生物序列。4、物种相对丰度和绝对丰度相对丰度：指注释到该物种的序列数占样本中所有微生物总序列数的百分比。绝对丰度：指注释到该物种的序列数占总数据量的百分比。5、基因/基因组覆盖度和平均测序深度基因/基因组覆盖度：指测序获得的序列与某物种的参考基因/基因组进行比对，序列覆盖的区域占基因/基因组总区域的比例。平均测序深度：将能与基因/基因组比对上的序列碱基数累加并除以基因/基因组被覆盖区域的总长，即为平均测序深度。6、碱基质量值（quality，Q）20及Q30碱基质量值：在高通量测序中，每测一个碱基都会给出相应的质量值，体现测序过程中碱基识别的可信度和错误率，通常以

文章来源：IVD从业者网

PCR类的方法与核酸检测实验室的核酸气溶胶污染就像一个硬币的两面，我们只能选择都要或者都不要，而无法选择要字还是要花。我的实验室也污染过：案例分享：当PCR实验室发生污染时该怎么做？我也做了很多的实验来筛选一个好的核酸去除剂DNA去除剂不能成为实验室“隐秘的角落”！结果让人触目惊心。可是对于从事核酸检测的实验室人员内心一直渴望一种终极的核酸气溶胶污染解决方案：对核酸气溶胶污染的房间进行空气核酸清除。这个实验我从构思到断断续续的实验用了差不多1年的时间，这期间也有和很多朋友进行交流，最终形成下面的实验方案。一、DNA去除剂的筛选

6月29日，深圳卫健委的一则《关于新冠核酸快检技术应用有关事项的通知》文件在行业内广泛传播，引发了激烈讨论，并被不少人认为是限制了新冠核酸快速检测的应用。在文件中，大家关注的主要有3点：1、各医疗机构使用快速核酸检测技术仅限：无流行病学史的发热儿童，无流行病学史且不属于高风险人群的发热门诊患者。2、其采样标本应当同时送新冠病毒核酸检测实验室进行实时荧光PCR

我对检测的认知经历了这样的历程：一开始认为检测是门严谨的科学（诊断试剂评价系列1-这些概念必须搞清楚），后来渐渐发现对检测结果的解读是玄学（如何解读“薛定谔的弱阳性”样品），最后经过无数次的打击之后终于醒悟，检测的底层逻辑原来是数学（神奇的泊松分布：低浓度样品的采样概率）。大部分人都不喜欢数学，但是今天的数学是能帮你省钱的混样数量的理论依据。

低浓度样本的检测取决于2个因素：检测体系的最低检测限和采样概率（采没采到和采到了几个）。最低检测限的评估方法已经很明确了，大家参考诊断试剂评价系列4-最低检测限，你做对了吗？但是采样概率的问题大部分人都避开了，因为低浓度样品的采样涉及泊松分布的概率问题，对于大部分检测人员来说最不能接受的就是概率。我也是在某个春日的午后在咖啡和试验不顺的刺激下突然看懂了泊松分布的公式。我以我肤浅的理解给大家讲讲如何运用泊松分布公式计算低浓度样品的采样概率，文后会附上计算好的表格。一、采样（sampling）的概率

PCR实验室主要存在2类风险：生物安全的风险和核酸污染的风险，前者危害人和环境，后者影响PCR试验的结果。本文是原博士与北京中科基因联合给大家带来的PCR实验室风险监测点以及相应的风险等级。一、PCR实验室的分区

HCl等核酸去除剂中，并且不能在实验室内倾倒，而应当至远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至1

荧光定量PCR（qPCR）是目前病原检测领域使用最为广泛的核酸检测方法（PCR检测技术概述）。尤其是非洲猪瘟和新冠发生后，qPCR检测得到了极大的普及，对于刚刚进入qPCR检测领域的人，很容易钻入了“唯Ct值”的牛角尖，今天我们就聊聊qPCR中的Ct值。一、Ct值的基本概念

这是本公众号在2020年的收官之作，在新冠和非洲猪瘟两种病毒面前，检测一夜之间成为了热点。作为一名普通的实验室检验员，我能做的只有尽自己的绵薄之力，传播一些知识，分享一些经验，以此来致敬这一年来或奋战在抗疫一线，或坚守在本职岗位，舍己为公的英雄们。

现在的部分检测实验室靠高投入采购高品质的试剂和仪器来提高检测的灵敏度，这种投入产出立竿见影。但是，随着检测量的加大，实验室污染导致的假阳性的问题愈发严重，如幽灵般如影随行。这其实也体现了检测的特点，不能简单用仪器和试剂的品牌价格来评估检测质量，检测的核心是人和严格的试验流程和管理制度。

昨晚我和我的两个助理一起讨论完这个主题后，一个助理得知闺蜜生病，心急如焚又帮不上忙。我在这里祝愿助理的闺蜜早日康复！

来源：分子诊断平台作者：宋杨，赵梦竹摘要：在PCR实验室的设计和建造越来越受到建设单位重视的情况下，从PCR实验室平面布局、通风空调系统两个方面进行设计要点分析，提出了PCR实验室按照四个区域设计为宜，实验室设备的布置不仅考虑实用同时要兼顾疏散，气流组织和压力控制保证气流单向流动防止气溶胶污染，同时在房间内设定、变风量阀应对生物安全柜开启和关闭时房间的压差扰动，供PCR实验室的建设单位和设计同行的相关人员参考。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase

我常常羡慕孩子眼中的二元世界，非黑即白，好人和坏人，美丽和丑陋，对事物的判断不会有丝毫犹豫。对于检测结果大多数也是二元的，阳性或阴性。可是成人的世界里哪有那么简单，弱阳性或者可疑的检测结果作为一种处于量子状态的比“薛定谔的猫”还神秘的阳性分分钟让检测人员怀疑人生。今天结合我的一些经验，跟大家一起分享一些弱阳性样品判读的原则。一、排除污染和非特异扩增

CRISPR技术获得诺贝尔奖是实至名归，但是让人遗憾的一个是居然是化学奖，另一个是张峰痛失大奖。2.CRISPR三巨头2012年8月17日，詹妮弗·杜德娜（Jennifer

在我心中，近100年生物技术最大的突破就是测序技术，正是由于测序技术的不断进步才使得人类可以破解生命的密码。但是一直以来由于成本较高加之技术复杂，大多数检测实验室始终无法将测序作为常规检测方法。近年来来随着纳米孔测序的兴起，使得大多数实验室使用测序作为常规检测的时代不再遥远！本文将从检测的角度来阐述测序技术。基因测序技术发展历史一、一代测序（Sanger法测序）

来源丨感控新青年这是目前为止国内最详尽的医学实验室设计建设要求的标准，值得好好学习学习。来源丨感控新青年

一、适用对象新型冠状病毒核酸筛查稀释混样技术（以下简称稀释混样）仅适用于大人群样本的筛查，稀释混样检测结果不作为最终确诊依据。在人群总体阳性率较低（低于0.1%）时更为适宜。以下人群不建议采用稀释混样检测：（一）重点区域人群（近期有疫情发生的小区含确诊病例和无症状感染者、老旧小区、人口密集小区、流动人口聚集区和近期离省外出人群）、其他不适合稀释混样检测的人群；（二）医疗机构就诊患者。二、实验室条件（一）根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令），具备在设区的市级人民政府卫生健康主管部门备案的生物安全二级及以上实验室。（二）根据《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发〔2010〕194号），具备经过省级卫生健康行政部门审核备案的临床基因扩增检验实验室。（三）医学检验实验室（常称为第三方实验室）应当符合《医学检验实验室基本标准（试行）》《医学检验实验室管理规范（试行）》等要求。三、生物安全要求根据《国家卫生健康委办公厅关于医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知》（国卫办医函〔2020〕53号）和《新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）》的有关要求，采样和实验室检测人员应采用生物安全三级实验室级别的个人防护。检测工作完成后，废弃物严格按照文件要求处理，不得保存样本。四、操作流程（一）材料准备。1.采样管。常规采样管，推荐含病毒保存液1～2ml的标准采样管。2.咽拭子。3.振荡器。4.其他开展核酸检测的常规物质准备。（二）采样与混合。1.咽拭子采样方法。被采集人员头部微仰，采样者将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，将拭子头浸入含1～3ml病毒保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中，尾部弃去，旋紧管盖。2.样本混合。将采集的数个样本（原则上不超过5个）各取200ul进行充分混合，形成混合待检样本。（三）核酸检测。核酸提取与检测过程按有关实验室常规标准操作流程进行。每一次上样扩增中，80个加样孔用于加入混合样本（如5混1，总计80×5个单样本）；10个加样孔用于单样本（单样本来自上述80×5个原液的随机样本）。（四）阳性结果判断与重测。1.检测结果先按照各检测试剂盒使用说明书的要求，对被检测基因位点逐一判定，出现任一位点阳性或能测出Ct值的混合样本，均作为重测对象。2.混合样本检出Ct值，其所有的单个原液样本需重新取样，按照常规方法进行单样本核酸检测。3.单样本检出阳性，其所在混合样本要全部按常规方法进行单样本核酸检测。五、质量控制（一）室内质控。每批上样检测应当在剩余加样孔中设置1个弱阳性质控样本和三个阴性质控样本（2份生理盐水和1份阴性混合样本）。3份阴性质控样本随机放在临床样本中间。弱阳性质控测定为阳性，3个阴性质控全部测定为阴性，视为在控。反之，则为失控，不可发出报告，应分析原因，必要时重新检测样本。（二）室间质评。实验室应参加省级及以上临床检验中心组织的室间质量评价（EQA）活动，按照活动要求完成质评物接收、储存、检测和回报检测结果等工作。六、注意事项（一）注意避免采样过程中的交叉污染，落实一人一消毒；混样室在每进行一批样本稀释混样操作后，应进行消毒处理。（二）拭子应完全浸润在病毒保存液中，样本在混合前后充分震荡（在振荡器上振荡30秒）。（三）稀释混样检测必须提取核酸，禁用“一步法”。（四）建议对试剂检测灵敏度进行评估，应选择灵敏度较高的检测试剂。（五）稀释混样检测的阴性样本按每批次扩增留取一份阴性样本备查。来源：卫生健康委网站

PCR或qPCR），本节以qPCR为例进行讲解，如何评价核酸检测方法。本章内容主要参照OIE《Manual

每一种方法都有其检测极限即最低检测限(LOD)，当样本中的核酸含量低于其LOD时就会漏检产生假阴性的结果。例如在《2020年新型冠状病毒核酸检测室间质量评价结果报告》中检测浓度为16000

我心目中检测技术史上的几次革命性发明分别是基于抗原抗体特异性结合原理的免疫标记技术，PCR技术和测序技术。今天我们来聊聊PCR技术，按照PCR技术的演进，人们习惯性的将PCR技术划分为三代：普通PCR技术，实时荧光定量PCR技术和数字PCR技术。一、普通PCR技术KARY

核酸检测实验室想完全杜绝核酸污染是不可能的。核酸检测实验室的管理者和实验人员必须要认识到核酸污染是不可避免的，但是污染的频率和概率是可控的。我们要做的是时刻保持警惕，尽最大努力将污染的概率降到最低，并且能第一时间发现污染并及时进行处理。先说说有史以来影响最大的实验室核酸污染事件当地时间4月18日，《华盛顿邮报》(Washington

前面讲了很多的试剂评价的内容，但是通常情况下我们评最关注的是试剂盒的最低检测限（LOD）/分析敏感性/灵敏度。尤其对于qPCR试剂盒的评价，到底能测到几个拷贝呢？试剂盒一般都写1个拷贝，真的都是1个拷贝吗？最低检测限（LOD）的检测通常分为两步:梯度稀释法使用定值的标准物质10倍倍比稀释，每个浓度重复3-5个重复，获得全部为阳性的最低浓度，如下图所示。这是我们目前最常用的获得LOD的方式，但是其实有几个问题：第一.使用没有量值的或量值不准的样品进行倍比稀释，我们无法得到试剂盒精确的LOD；第二.10倍倍比稀释通常无法区分目前市场上主流qPCR试剂盒；第三对于低浓度样本，重复性不好，结果带有随机性。最后的结果是我们仍然无法确定LOD。95%的概率法LOD可以定义为不低于95%的置信区间区别于0的最低检测浓度。这是OIE里面的一个例子横坐标是稀释度，从左向右稀释度由大到小（浓度由低到高），纵坐标是出现阳性的概率。大家可以看到浓度越低检出阳性的概率越低，浓度越高检出阳性的概率越高，到达一定浓度后100%的检测都是阳性。为什么会这样呢？用我喜爱的醪糟汤圆给大家举例。如果我煮一锅的汤圆，一共有500ml水，我的勺子容量是50ml，每勺可以装盛10个汤圆，汤圆在锅里呈自由运动。当我往锅里放100个汤圆时，我每次大概率都可以盛到汤圆；但是如果往锅里只放10个汤圆时，每次盛到汤圆的数量按照一定的概率出现，我有可能一个也盛不到，也有可能能一次盛到1个到10个，但是大概率是盛不到或盛1个，每一次盛汤圆都是一个独立的事件，每次能盛到几个汤圆是无法预测的，但是盛到几个汤圆的概率是可以计算的，这种概率符合泊松分布的规律，大家有兴趣可以去了解一下。回到我们的LOD，当样本浓度足够低时，我们每次从核酸溶液中能吸到的模板量都是随机的，并且都是独立事件。所以当我们仅做3次重复时，每次重复的结果可能都不一样。根据我们实验室获得的数据1

血清学方法看似简单实则种类繁多，比如病毒中和实验virus

从今天开始系统介绍下诊断试剂评价相关的内容，今天从概念开始！检测人员应该具备的第一项基本素质就是遵照标准而非专家，信数据而非销售。就像法官要依法判案，检测人员的法就是标准：国际标准，国家标准和行业标准等。当然现在新技术新方法层出不穷，而标准经常会滞后，我们也需要时刻关注这些新技术的进展情况。当我们要去比较不同的试剂盒和不同方法时如何做到科学公正呢？其实在检测领域，检测技术一直在更新，诊断试剂的评价标准确是全球通用的并且基本不变。本文主要结合OIE《Manual